39450-01-6 蛋白酶K
中文名称:蛋白酶K
中文同义词:蛋白酶K;蛋白酶K(原装);蛋白内切酶K;内肽酶K;肽酶K;蛋白酶K(冻干粉);蛋白酶K/PROTEINASEK;蛋白酶K
英文名称:ProteinaseK
英文同义词:ProteinaseK,PowderAndSolutionAvailable;ProteinaseK,fromTritirachiumalbumLimber
CAS号:39450-01-6
分子式:C29H27N2O12P
分子量:626.504641
EINECS号:254-457-8
应用:蛋白酶K时常应用于分子生物学领域。在制备核酸时,蛋白酶K可以将杂蛋白去除,并迅速使核酸酶失活,避免其降解目标产物DNA和RNA。另外,蛋白酶K还有其他优点,它在变性剂存在下仍能保有活性,如SDS、尿素、EDTA等等,这点与其他蛋白酶(如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶)相当不同。
用途:蛋白酶K由于能够消化角蛋白(kratin)因此被命名为蛋白酶K。蛋白酶K家族包含了各种由真菌、酵母及革兰氏阴性细菌分泌的细胞内肽酶,其中细菌分泌的酶有高度的序列相似性(>55%)。林伯氏白色念球菌(TritirachiumalbumLimber)分泌产生蛋白酶K是该家族的模式蛋白。蛋白酶K对大多数底物均有切割活性,但是偏好于带有脂肪族及芳香烃的肽链。其属于丝氨酸蛋白酶,拥有典型的丝氨酸活性位点:Asp39–His69–Ser224。其含有一个单练肽链包含277氨基酸位点,并拥有2个二硫键和一个空置的半胱氨酸位点以及两个钙离子结合位点。蛋白酶K的应用主要为核酸提取时去除DNA酶和RNA酶,并且可将结合于基因组上的组蛋白去除,还可用于碱性磷酸酶的失活。目前分子生物学技术已应用于许多检测标准中,例如转基因检测、动物属性检测、致病微生物检测等。在分子生物学检测中核酸的提取质量直接影响了后续PCR反应的扩增效率。许多标准在核酸提取步骤中都设立了添加蛋白酶K消化的步骤,以期提取较纯的核酸。为了保护核酸,分子生物学核酸提取实验中通常含有EDTA等试剂,由于EDTA可以与金属离子络合,因此可能会导致酶活性受到影响;并且通常为pH8.0时和55℃条件下进行消化,不同pH值和温度条件会使得酶活性受到影响。
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