人1,25二羟基维生素D（1,25-(OH)2D）ELISA试剂盒 技术升级elisa试剂盒检测方法

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA) 。往预先包被成纤维细

胞生长因子7 (FGF-7) 抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的

检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下

转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的成纤维

细胞生长因子7 (FGF-7) 呈正相关。用酶标仪在450NM波长 下测定吸光度(OD

值)，计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.血清:使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血

液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆: EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液: 3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.保存:如果样本收集后不及时检测，请按- -次用量分装，冻存于-20°C,避免反

复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备

20X洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1: 20稀释，即1份的20X洗涤缓冲液加19份的

蒸馏水。

洗板方法.

1.手工洗板:甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1MIN后甩尽孔内液体，在吸

水纸上拍干，如此洗板5次。

2.自动洗板机:每孔注入洗液350ML，浸泡1MIN, 洗板5次。

操作步骤

1.从室温平衡20MIN后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回

4°C。

2.设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各

50ML;

3.待测样本孔先加待测样本10ML,再加样本稀释液40ML;

4.随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP) 标记的检测

抗原100ML，用封板膜封住反应孔，37°C水浴锅或恒温箱温育60MIN。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1MIN,甩去洗涤液，吸水纸

上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50ML, 37°C避光孵育15MIN。

7.每孔加入终止液50ML，15MIN内， 在450NM波长处测定各孔的OD值。